商(Shang)品(Pin)描(Miao)述(Shu)：(?)

产(Chan)品(Pin)介(Jie)绍(Shao)

产(Chan)品(Pin)别(Bie)名(Ming)

HL-1 Medium不(Bu)含(Han)L-谷(Gu)氨(An)酰(Xian)an，(?)液(Ye)体(Ti)，(?)无(Wu)菌(Jun)过(Guo)滤(Lu)，(?)适(Shi)合(He)细(Xi)胞(Bao)培(Pei)养(Yang)。(?)

Claycomb培(Pei)养(Yang)基(Ji)是(Shi)以(Yi)建(Jian)立(Li)HL-1细(Xi)胞(Bao)系(Xi)的(De)William Claycomb博(Bo)士(Shi)命(Ming)名(Ming)的(De)，(?)它(Ta)专(Zhuan)用(Yong)于(Yu)培(Pei)养(Yang)小(Xiao)鼠(Shu)心(Xin)肌(Ji)细(Xi)胞(Bao)生(Sheng)长(Chang)。(?)HL-1是(Shi)第(Di)一(Yi)个(Ge)能(Neng)够(Gou)在(Zai) 体(Ti)外(Wai)维(Wei)持(Chi)分(Fen)化(Hua)心(Xin)肌(Ji)细(Xi)胞(Bao)表(Biao)型(Xing)和(He)收(Shou)缩(Suo)活(Huo)性(Xing)的(De)细(Xi)胞(Bao)系(Xi)。(?)HL-1细(Xi)胞(Bao)系(Xi)可(Ke)用(Yong)于(Yu)研(Yan)究(Jiu)心(Xin)肌(Ji)梗(Geng)塞(Sai)后(Hou)的(De)心(Xin)肌(Ji)细(Xi)胞(Bao)肥(Fei)大(Da)、(?)测(Ce)试(Shi)新(Xin)型(Xing)心(Xin)脏(Zang)治(Zhi)疗(Liao)药(Yao)物(Wu)和(He)疗(Liao)法(Fa)、(?)生(Sheng)产(Chan)高(Gao)水(Shui)平(Ping)心(Xin)肌(Ji)蛋(Dan)白(Bai)以(Yi)及(Ji)研(Yan)究(Jiu)成(Cheng)熟(Shu)心(Xin)肌(Ji)细(Xi)胞(Bao)特(Te)异(Yi)性(Xing)基(Ji)因(Yin)。(?)补(Bu)充(Chong)100 μ(?)M去(Qu)甲(Jia)肾(Shen)上(Shang)腺(Xian)su、(?)10％(?)胎(Tai)牛(Niu)血(Xue)清(Qing)（(?)FBS）(?)和(He)4mM L-谷(Gu)氨(An)酰(Xian)an的(De)Claycomb培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)将(Jiang)能(Neng)够(Gou)维(Wei)持(Chi)HL-1细(Xi)胞(Bao)系(Xi)和(He)成(Cheng)熟(Shu)心(Xin)肌(Ji)细(Xi)胞(Bao)的(De)行(Xing)为(Wei)。(?)在(Zai)光(Guang)学(Xue)显(Xian)微(Wei)镜(Jing)下(Xia)观(Guan)察(Cha)HL-1细(Xi)胞(Bao)时(Shi)，(?)可(Ke)以(Yi)观(Guan)察(Cha)到(Dao)细(Xi)胞(Bao)个(Ge)体(Ti)和(He)群(Qun)体(Ti)的(De)收(Shou)缩(Suo)随(Sui)心(Xin)肌(Ji)细(Xi)胞(Bao)逐(Zhu)渐(Jian)融(Rong)合(He)而(?)变(Bian)得(De)更(Geng)加(Jia)频(Pin)繁(Fan)。(?)

运(Yun)输(Shu)和(He)保(Bao)存(Cun)

放(Fang)置(Zhi)于(Yu)含(Han)有(You)生(Sheng)物(Wu)冰(Bing)袋(Dai)的(De)保(Bao)温(Wen)箱(Xiang)中(Zhong)低(Di)温(Wen)运(Yun)输(Shu)（(?)储(Chu)存(Cun)条(Tiao)件(Jian)2-8℃(?) 避(Bi)光(Guang)储(Chu)存(Cun)）(?)产(Chan)品(Pin)保(Bao)质(Zhi)期(Qi)12个(Ge)月(Yue)。(?)

注(Zhu)意(Yi)事(Shi)项(Xiang)：(?)

仅(Jin)限(Xian)科(Ke)研(Yan)用(Yong)。(?)

培(Pei)养(Yang)体(Ti)系(Xi)中(Zhong)的(De)一(Yi)些(Xie)组(Zu)分(Fen)是(Shi)对(Dui)人(Ren)体(Ti)健(Jian)康(Kang)有(You)害(Hai)的(De)物(Wu)质(Zhi)，(?)请(Qing)不(Bu)要(Yao)用(Yong)暴(Bao)露(Lu)的(De)皮(Pi)肤(Fu)接(Jie)触(Chu)培(Pei)养(Yang)体(Ti)系(Xi)的(De)液(Ye)体(Ti)和(He)有(You)培(Pei)养(Yang)体(Ti)系(Xi)的(De)液(Ye)体(Ti)残(Can)留(Liu)的(De)容(Rong)器(Qi)内(Nei)部(Bu)；(?)这(Zhe)部(Bu)分(Fen)有(You)害(Hai)物(Wu)质(Zhi)的(De)浓(Nong)度(Du)和(He)危(Wei)害(Hai)性(Xing)都(Du)较(Jiao)低(Di)，(?)如(Ru)有(You)接(Jie)触(Chu)，(?)立(Li)即(Ji)用(Yong)自(Zi)来(Lai)水(Shui)冲(Chong)洗(Xi)即(Ji)可(Ke)。(?)

细(Xi)胞(Bao)培(Pei)养(Yang)步(Bu)骤(Zhou)：(?)

一(Yi)．(?)培(Pei)养(Yang)基(Ji)及(Ji)培(Pei)养(Yang)冻(Dong)存(Cun)条(Tiao)件(Jian)准(Zhun)备(Bei)：(?)

1）(?) 准(Zhun)备(Bei)DMEM-H培(Pei)养(Yang)基(Ji)(添(Tian)加(Jia)NaHCO3 1.5g/L)，(?)90%；(?)胎(Tai)牛(Niu)血(Xue)清(Qing)，(?)10%。(?)也(Ye)可(Ke)根(Gen)据(Ju)实(Shi)验(Yan)需(Xu)要(Yao)选(Xuan)择(Ze)悬(Xuan)浮(Fu)培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)使(Shi)293T细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)浮(Fu)生(Sheng)长(Chang)。(?)

2）(?) 培(Pei)养(Yang)条(Tiao)件(Jian)：(?) 气(Qi)相(Xiang)：(?)空(Kong)气(Qi)，(?)95%；(?)二(?)氧(Yang)化(Hua)碳(Tan)，(?)5%。(?) 温(Wen)度(Du)：(?)37摄(She)氏(Shi)度(Du)，(?)培(Pei)养(Yang)箱(Xiang)湿(Shi)度(Du)为(Wei)70%-80%。(?)

3）(?) 冻(Dong)存(Cun)液(Ye)：(?)90%培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)10%DMSO，(?)现(Xian)用(Yong)现(Xian)配(Pei)。(?)液(Ye)氮(Dan)储(Chu)存(Cun)。(?)

二(?)．(?) 细(Xi)胞(Bao)处(Chu)理(Li)：(?)

1）(?) 复(Fu)苏(Su)细(Xi)胞(Bao)：(?)将(Jiang)含(Han)有(You)1mL细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)的(De)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)在(Zai)37℃(?)水(Shui)浴(Yu)中(Zhong)迅(Xun)速(Su)摇(Yao)晃(Huang)解(Jie)冻(Dong)，(?)加(Jia)入(Ru)4mL培(Pei)养(Yang)基(Ji)混(Hun)合(He)均(Jun)匀(Yun)。(?)在(Zai)1000RPM条(Tiao)件(Jian)下(Xia)离(Li)心(Xin)4分(Fen)钟(Zhong)，(?)弃(Qi)去(Qu)上(Shang)清(Qing)液(Ye)，(?)补(Bu)加(Jia)1-2mL培(Pei)养(Yang)基(Ji)后(Hou)吹(Chui)匀(Yun)。(?)然(Ran)后(Hou)将(Jiang)所(Suo)有(You)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)加(Jia)入(Ru)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)中(Zhong)培(Pei)养(Yang)过(Guo)夜(Ye)（(?)或(Huo)将(Jiang)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)加(Jia)入(Ru)10cm皿(Min)中(Zhong)，(?)加(Jia)入(Ru)约(Yue)8ml培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)培(Pei)养(Yang)过(Guo)夜(Ye)）(?)。(?)第(Di)二(?)天(Tian)换(Huan)液(Ye)并(Bing)检(Jian)查(Cha)细(Xi)胞(Bao)密(Mi)度(Du)。(?)

2）(?) 细(Xi)胞(Bao)传(Chuan)代(Dai)：(?)如(Ru)果(Guo)细(Xi)胞(Bao)密(Mi)度(Du)达(Da)80%-90%，(?)即(Ji)可(Ke)进(Jin)行(Xing)传(Chuan)代(Dai)培(Pei)养(Yang)。(?)

对(Dui)于(Yu)贴(Tie)壁(Bi)细(Xi)胞(Bao)，(?)传(Chuan)代(Dai)可(Ke)参(Can)考(Kao)以(Yi)下(Xia)方(Fang)法(Fa)：(?)

1. 弃(Qi)去(Qu)培(Pei)养(Yang)上(Shang)清(Qing)，(?)用(Yong)不(Bu)含(Han)钙(Gai)、(?)镁(Mei)离(Li)子(Zi)的(De)PBS润(Run)洗(Xi)细(Xi)胞(Bao)1-2次(Ci)。(?)

2. 加(Jia)2ml消(Xiao)化(Hua)液(Ye)（(?)0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）(?)于(Yu)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)中(Zhong)，(?)置(Zhi)于(Yu)37℃(?)培(Pei)养(Yang)箱(Xiang)中(Zhong)消(Xiao)化(Hua)1-2分(Fen)钟(Zhong)，(?)然(Ran)后(Hou)在(Zai)显(Xian)微(Wei)镜(Jing)下(Xia)观(Guan)察(Cha)细(Xi)胞(Bao)消(Xiao)化(Hua)情(Qing)况(Kuang)，(?)若(Ruo)细(Xi)胞(Bao)大(Da)部(Bu)分(Fen)变(Bian)圆(Yuan)并(Bing)脱(Tuo)落(Luo)，(?)迅(Xun)速(Su)拿(Na)回(Hui)操(Cao)作(Zuo)台(Tai)，(?)轻(Qing)敲(Qiao)几(Ji)下(Xia)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)后(Hou)加(Jia)少(Shao)量(Liang)培(Pei)养(Yang)基(Ji)终(Zhong)止(Zhi)消(Xiao)化(Hua)。(?)

3. 按(An)6-8ml/瓶(Ping)补(Bu)加(Jia)培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)轻(Qing)轻(Qing)打(Da)匀(Yun)后(Hou)吸(Xi)出(Chu)，(?)在(Zai)1000RPM条(Tiao)件(Jian)下(Xia)离(Li)心(Xin)4分(Fen)钟(Zhong)，(?)弃(Qi)去(Qu)上(Shang)清(Qing)液(Ye)，(?)补(Bu)加(Jia)1-2mL培(Pei)养(Yang)液(Ye)后(Hou)吹(Chui)匀(Yun)。(?)

4. 将(Jiang)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)按(An)1：(?)2到(Dao)1：(?)5的(De)比(Bi)例(Li)分(Fen)到(Dao)新(Xin)的(De)含(Han)8ml培(Pei)养(Yang)基(Ji)的(De)新(Xin)皿(Min)中(Zhong)或(Huo)者(Zhe)瓶(Ping)中(Zhong)。(?)

3）(?)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)：(?)待(Dai)细(Xi)胞(Bao)生(Sheng)长(Chang)状(Zhuang)态(Tai)良(Liang)好(Hao)时(Shi)，(?)可(Ke)进(Jin)行(Xing)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)。(?)贴(Tie)壁(Bi)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)时(Shi)，(?)弃(Qi)去(Qu)培(Pei)养(Yang)基(Ji)后(Hou)加(Jia)入(Ru)少(Shao)量(Liang)，(?)细(Xi)胞(Bao)变(Bian)圆(Yuan)脱(Tuo)落(Luo)后(Hou)，(?)加(Jia)入(Ru)约(Yue)1ml含(Han)血(Xue)清(Qing)的(De)培(Pei)养(Yang)基(Ji)后(Hou)加(Jia)入(Ru)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)中(Zhong)，(?)再(Zai)添(Tian)加(Jia)10%DMSO后(Hou)进(Jin)行(Xing)冻(Dong)存(Cun)。(?)

冷(Leng)冻(Dong)保(Bao)存(Cun)细(Xi)胞(Bao)之(Zhi)方(Fang)法(Fa)？(?)

冷(Leng)冻(Dong)保(Bao)存(Cun)方(Fang)法(Fa)一(Yi): 冷(Leng)冻(Dong)管(Guan)置(Zhi)于(Yu)4℃(?) 30~60 分(Fen)钟(Zhong)→(?) （(?)-20 ℃(?)30 分(Fen)钟(Zhong)*）(?) →(?) -80 ℃(?)16~18 小(Xiao)时(Shi)（(?)或(Huo)隔(Ge)夜(Ye)）(?) →(?) 液(Ye)氮(Dan)槽(Cao)vaporphase 长(Chang)期(Qi)储(Chu)存(Cun)。(?)

冷(Leng)冻(Dong)保(Bao)存(Cun)方(Fang)法(Fa)二(?): 冷(Leng)冻(Dong)管(Guan)置(Zhi)于(Yu)已(Yi)设(She)定(Ding)程(Cheng)序(Xu)之(Zhi)可(Ke)程(Cheng)序(Xu)降(Jiang)温(Wen)机(Ji)中(Zhong)每(Mei)分(Fen)钟(Zhong)降(Jiang)1-3 ℃(?) 至(Zhi)80 ℃(?) 以(Yi)下(Xia)，(?) 再(Zai)放(Fang)入(Ru)液(Ye)氮(Dan)槽(Cao)vapor phase长(Chang)期(Qi)储(Chu)存(Cun)。(?)-20 ℃(?)不(Bu)可(Ke)超(Chao)过(Guo)1 小(Xiao)时(Shi)，(?) 以(Yi)防(Fang)止(Zhi)冰(Bing)晶(Jing)过(Guo)大(Da)，(?)造(Zao)成(Cheng)细(Xi)胞(Bao)大(Da)量(Liang)死(Si)亡(Wang)，(?)亦(Yi)可(Ke)跳(Tiao)过(Guo)此(Ci)步(Bu)骤(Zhou)直(Zhi)接(Jie)放(Fang)入(Ru)-80℃(?) 冰(Bing)箱(Xiang)中(Zhong)，(?)惟(Wei)存(Cun)活(Huo)率(Lu)稍(Shao)微(Wei)降(Jiang)低(Di)一(Yi)些(Xie)。(?)

公(Gong)司(Si)正(Zheng)在(Zai)出(Chu)售(Shou)的(De)产(Chan)品(Pin)：(?)

1）(?)将(Jiang)培(Pei)养(Yang)基(Ji)在(Zai)37℃(?)水(Shui)浴(Yu)锅(Guo)预(Yu)热(Re)；(?)准(Zhun)备(Bei)一(Yi)个(Ge)15mL无(Wu)菌(Jun)的(De)离(Li)心(Xin)管(Guan)，(?)加(Jia)入(Ru)8mL预(Yu)热(Re)培(Pei)养(Yang)基(Ji)。(?)

2）(?)将(Jiang)冻(Dong)存(Cun)细(Xi)胞(Bao)从(Cong)液(Ye)氮(Dan)罐(Guan)中(Zhong)取(Qu)出(Chu)，(?)快(Kuai)速(Su)放(Fang)入(Ru)37℃(?)水(Shui)浴(Yu)锅(Guo)中(Zhong)复(Fu)温(Wen)（(?)可(Ke)准(Zhun)备(Bei)一(Yi)洁(Jie)净(Jing)的(De)烧(Shao)杯(Bei)，(?)装(Zhuang)满(Man)37℃(?)的(De)水(Shui)，(?)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)取(Qu)出(Chu)后(Hou)迅(Xun)速(Su)放(Fang)入(Ru)烧(Shao)杯(Bei)内(Nei)，(?)再(Zai)逐(Zhu)步(Bu)转(Zhuan)移(Yi)到(Dao)水(Shui)浴(Yu)锅(Guo)中(Zhong)）(?)。(?)轻(Qing)轻(Qing)晃(Huang)动(Dong)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)，(?)使(Shi)细(Xi)胞(Bao)能(Neng)在(Zai)1~2min内(Nei)解(Jie)冻(Dong)，(?)使(Shi)细(Xi)胞(Bao)能(Neng)尽(Jin)快(Kuai)通(Tong)过(Guo)易(Yi)受(Shou)损(Sun)的(De)温(Wen)度(Du)段(Duan)（(?)-5~0℃(?)）(?)。(?)注(Zhu)意(Yi)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)管(Guan)口(Kou)不(Bu)能(Neng)没(Mei)入(Ru)水(Shui)中(Zhong)，(?)避(Bi)免(Mian)引(Yin)起(Qi)污(Wu)染(Ran)。(?)

3）(?)用(Yong)75%酒(Jiu)精(Jing)擦(Ca)拭(Shi)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)后(Hou)再(Zai)置(Zhi)于(Yu)超(Chao)净(Jing)台(Tai)内(Nei)，(?)将(Jiang)管(Guan)内(Nei)细(Xi)胞(Bao)转(Zhuan)移(Yi)至(Zhi)准(Zhun)备(Bei)好(Hao)的(De)离(Li)心(Xin)管(Guan)内(Nei)，(?)轻(Qing)轻(Qing)吹(Chui)打(Da)液(Ye)体(Ti)，(?)使(Shi)细(Xi)胞(Bao)均(Jun)匀(Yun)分(Fen)散(San)，(?)降(Jiang)低(Di)DMSO浓(Nong)度(Du)，(?)吹(Chui)打(Da)时(Shi)避(Bi)免(Mian)产(Chan)生(Sheng)气(Qi)泡(Pao)。(?)用(Yong)新(Xin)鲜(Xian)培(Pei)养(Yang)基(Ji)洗(Xi)管(Guan)壁(Bi)2次(Ci)，(?)均(Jun)转(Zhuan)移(Yi)至(Zhi)离(Li)心(Xin)管(Guan)内(Nei)。(?)

4）(?)800rpm离(Li)心(Xin)5min，(?)弃(Qi)上(Shang)清(Qing)，(?)加(Jia)入(Ru)新(Xin)鲜(Xian)的(De)培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)吹(Chui)打(Da)制(Zhi)成(Cheng)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)。(?)

5）(?)将(Jiang)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)转(Zhuan)移(Yi)至(Zhi)T25细(Xi)胞(Bao)瓶(Ping)内(Nei)，(?)补(Bu)加(Jia)适(Shi)量(Liang)的(De)培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)轻(Qing)轻(Qing)晃(Huang)动(Dong)细(Xi)胞(Bao)瓶(Ping)使(Shi)细(Xi)胞(Bao)分(Fen)布(Bu)均(Jun)匀(Yun)，(?)放(Fang)入(Ru)温(Wen)箱(Xiang)内(Nei)培(Pei)养(Yang)。(?)

6）(?)第(Di)二(?)天(Tian)观(Guan)察(Cha)细(Xi)胞(Bao)贴(Tie)壁(Bi)生(Sheng)长(Chang)情(Qing)况(Kuang)，(?)换(Huan)新(Xin)鲜(Xian)培(Pei)养(Yang)基(Ji)以(Yi)去(Qu)除(Chu)死(Si)细(Xi)胞(Bao)。(?)继(Ji)续(Xu)培(Pei)养(Yang)，(?)待(Dai)细(Xi)胞(Bao)长(Chang)至(Zhi)80~90%汇(Hui)合(He)时(Shi)正(Zheng)常(Chang)传(Chuan)代(Dai)。(?)一(Yi)般(Ban)刚(Gang)复(Fu)苏(Su)的(De)细(Xi)胞(Bao)需(Xu)经(Jing)过(Guo)2~3次(Ci)传(Chuan)代(Dai)，(?)细(Xi)胞(Bao)活(Huo)力(Li)恢(Hui)复(Fu)后(Hou)才(Cai)能(Neng)进(Jin)行(Xing)后(Hou)续(Xu)的(De)实(Shi)验(Yan)。(?)